实验方案
cGAS-STING 通路激活后 I 型干扰素检测流程
放疗会让肿瘤细胞胞质里出现双链 DNA（dsDNA），cGAS 识别后激活 STING，下游推动 I 型干扰素（IFN-I）表达。下面是验证通路被激活的一套常规流程，供自己备查。
1. 细胞处理
- 细胞系：B16-F10 / MC38（小鼠），或 A549（人）。
- 照射剂量：单次 8 Gy（高剂量单次更容易触发 cGAS-STING）。
- 收样时间点：照射后 0 / 6 / 24 / 48 h。
2. 通路激活的读出指标
| 层次 | 指标 | 方法 |
|---|---|---|
| 上游 | 胞质 dsDNA | 抗 dsDNA 免疫荧光 |
| 中游 | TBK1、IRF3 磷酸化 | Western blot（p-TBK1 / p-IRF3） |
| 下游 | Ifnb1、Cxcl10 mRNA | RT-qPCR |
| 分泌 | IFN-β 蛋白 | ELISA |
3. RT-qPCR 关键引物
小鼠 Ifnb1、Cxcl10、Isg15，内参用 Actb。每个时间点至少 3 个生物学重复。
4. 常见坑
- 血清里的核酸酶会降解胞外 dsDNA，免疫荧光前注意洗够次数。
- STING 在部分肿瘤细胞里本身表观沉默，阴性结果先做一遍 STING WB 确认表达。
- 加 STING 激动剂（如 DMXAA、cGAMP）做阳性对照，排除检测体系本身的问题。
下一篇打算把放疗联合 STING 激动剂的体内实验排布也记下来。